laboratorio 9. Aislamiento y cultivo de hongos

Aislamiento y cultivo de hongos

autores: jean steven vasquez, alison ortiz, danna erazo, zara

Objetivo general

Comprender las técnicas básicas de aislamiento, cultivo e identificación de hongos, diferenciando su morfología y estructuras según su tipo y procedencia.

Tipos de hongos trabajados en la práctica

• Dermatofitos y levaduras: Patógenos humanos (ej. Trichophyton, Microsporum, Candida).

• Fitopatógenos: Afectan tejidos vegetales (ej. Fusarium, Colletotrichum).

• Acuáticos: Habitantes de medios acuáticos (ej. Saprolegnia).

• Entomopatógenos: Infectan insectos (ej. Metarhizium, Beauveria).

Procedimientos principales

Hongos acuáticos (método de cebado con semillas)

• Uso de semillas esterilizadas en agua de estanque.

• Incubación a 25°C durante 7 días.

• Aislamiento en medio PDA con antibiótico.

Trampa con moscas (entomopatógenos)

• Se utilizan cadáveres de moscas Drosophila en cámaras húmedas con suelo.

• Se aíslan colonias fúngicas en medios selectivos como SDA.

Hongos clínicos (piel, uñas, pelo)

• Se toman muestras de zonas afectadas.

• Se siembran en medios Sabouraud (SDA) con antibióticos para evitar contaminación bacteriana.

• Observación con hidróxido de potasio (KOH) y colorantes (azul de lactofenol).

Hongos fitopatógenos

• Desinfección superficial de tejidos vegetales.

• Siembra de áreas de transición entre tejido sano y enfermo en PDA.

resultado:

levaduras vivas

bacteria salmonela spp

Materiales y reactivos utilizados

• Microscopio, medios de cultivo (SDA, PDA), colorantes (azul de metileno, lactofenol), KOH, antibióticos (cloranfenicol), semillas, insectos (moscas), muestras clínicas y vegetales.

Identificación

• Análisis macroscópico (colonial) y microscópico (estructuras reproductivas).

• Uso de clave dicotómica para identificar géneros de hongos.

Resultados esperados

• Observación de colonias fúngicas típicas según el tipo de hongo.

• Identificación mediante comparación con claves y referencias visuales.

preguntas orientadoras:

1. ¿Qué importancia tienen los hongos dentro del ecosistema y como patógenos?

Los hongos tienen roles ecológicos clave:

• Descomponedores: Reciclan materia orgánica en los ecosistemas.

• Simbiontes: Forman micorrizas con plantas, mejorando su absorción de nutrientes.

• Patógenos: Afectan humanos (Candida, Trichophyton), animales, insectos (Beauveria), plantas (Fusarium) y peces (Saprolegnia).

• Uso industrial y biotecnológico: Producción de antibióticos, enzimas, alimentos fermentados.

2. ¿Qué características morfológicas permiten identificar a los hongos?

• Macroscópicas:

  • Forma, color, textura y bordes de la colonia en el medio de cultivo.

• Microscópicas:

  • Tipo de esporas (conidios, esporangiosporas), hifas (septadas o cenocíticas), presencia de estructuras reproductivas como conidióforos, fialides o clamidosporas.

3. ¿Qué factores pueden influir en el crecimiento de los hongos?

• Temperatura: La mayoría crece entre 25°C y 30°C.

• Humedad: Ambientes húmedos favorecen el crecimiento.

• pH: Prefieren ambientes ligeramente ácidos (pH 5-6).

• Nutrientes: Necesitan carbono, nitrógeno, minerales.

• Oxígeno: La mayoría son aerobios obligados.

4. ¿Qué importancia tiene utilizar diferentes tipos de muestras y medios de cultivo?

• Diferentes muestras (piel, suelo, agua, vegetal) permiten aislar distintos tipos de hongos (clínicos, ambientales, fitopatógenos, entomopatógenos).

• Medios específicos como PDA, SDA o medios con antibióticos, favorecen el aislamiento selectivo y reducen la contaminación bacteriana.

5. ¿Por qué es importante realizar la siembra y observación microscópica del hongo?

• La siembra permite el aislamiento y crecimiento puro del hongo.

• La observación microscópica revela estructuras características esenciales para la identificación taxonómica precisa del género o especie.

conclusiones:

Comprensión de los medios de cultivo: Se logró identificar y diferenciar los distintos tipos de medios de cultivo según su composición química (sintéticos y complejos), su consistencia física (líquidos, sólidos y semisólidos) y su función (selectivos, diferenciales, de enriquecimiento y de transporte).

Importancia de la esterilización: Se comprendió que la esterilización adecuada de los medios es fundamental para evitar contaminaciones y asegurar que el crecimiento observado proviene únicamente de los microorganismos inoculados. Se aplicaron métodos como el autoclave, el flameado y la filtración según el tipo de medio.

Preparación práctica de medios: Se realizaron cálculos correctos para preparar 500 mL de distintos tipos de medios, siguiendo instrucciones del fabricante, y se aplicaron técnicas de disolución, esterilización y vertido en condiciones controladas.

Aplicación del muestreo ambiental: A través de la siembra de muestras ambientales (aire, superficie, agua o suelo), se aprendió a utilizar técnicas de estriado y extendido para fomentar el crecimiento microbiano, lo cual permitió observar las colonias formadas e identificar sus características macroscópicas.

Relación entre medio y análisis microbiológico: Se entendió cómo la consistencia del medio influye directamente en el tipo de análisis microbiológico posible: medios líquidos para cultivos masivos, sólidos para aislamiento de colonias, y semisólidos para pruebas de motilidad y metabolismo.